এর কার্যপ্রণালী হলো সংবেদনশীল অণুজীবের 30S রাইবোসোমাল সাবইউনিটের সাথে আবদ্ধ হয়ে প্রোটিন সংশ্লেষণকে বাধা দেওয়া।
অক্সিটেট্রাসাইক্লিন, যার ফলে
রাইবোসোম এবং অ্যামিনোঅ্যাসাইল-টিআরএনএ-এর মধ্যে সংযোগে বাধা দেয়। এটাও বিশ্বাস করা হয় যে অক্সিটেট্রাসাইক্লিন ৫০এস রাইবোসোমের সাথে বিপরীতভাবে সংযুক্ত হয় এবং সংবেদনশীল অণুজীবের সাইটোপ্লাজমিক ঝিল্লির ভেদ্যতা পরিবর্তন করে। উচ্চ ঘনত্বের অক্সিটেট্রাসাইক্লিন কোষে প্রোটিন সংশ্লেষণকেও বাধা দিতে পারে।